Absorbancję danego roztworu można zmierzyć przy różnych
długościach fali lub za pomocą różnych filtrów.
Należy jednak pamiętać, że nie wolno mierzyć absorpcji
przy dowolnej długości fali (lub z dowolnym filtrem), ponieważ niekiedy
dla niektórych długości fal mogą występować odchylenia od prawa Lamberta-Beera.
Występowanie takich odchyleń można stwierdzić sporządzając wykres
zależności absorbancji przy pewnej długości fali w zależności od stężenia
substancji barwnej w roztworze.
W analizie kolorymetrycznej pomiarów absorpcji dokonuje
się wyłącznie przy długościach fal, dla których spełnione jest prawo
Lamberta-Beera.
Należy również unikać pomiaru absorbancji w zakresie
długości fal, w którym małym zmianom długości fal odpowiadają duże
zmiany absorbancji (w obszarze tym wykres widma absorpcji jest stromy).
W takim obszarze małe, przypadkowe zmiany długości fali mogą być przyczyną
dużych błędów.
Pomiar absorbancji należy wykonywać w miarę możności
przy długości fali odpowiadającej maksimum absorpcji. Spełnienie tego
warunku zapewnia największą czułość i dokładność pomiaru (w maksimum
absorpcji najczęściej przypadkowe, małe zmiany długości fali nie powodują
dużych błędów w pomiarze absorbancji).
Przy długości fali odpowiadającej maksimum absorpcji
określona zmiana stężenia powoduje największe zmiany absorbancji.
Z rysunku X-4 widać, że zmiany stężenia c można najłatwiej stwierdzić,
wykonując pomiary przy długości fali vii. Taka sama zmiana stężenia
powoduje przy długości fali Aa o wiele mniejszą, a więc trudniejszą
do zmierzenia zmianę absorbancji.
Stosując kolorymetr z filtrami, pomiar absorpcji wykonuje
się przy filtrze przepuszczającym światło w zakresie, w którym jest
ono maksymalnie pochłaniane przez roztwór. Oznacza to, że filtr nie
powinien w tym zakresie absorbować światła, a poza tym zakresem powinien
maksymalnie zatrzymywać światło. Jeżeli widmo absorpcji badanego roztworu
jest nieznane, to wybiera się taki filtr, aby jego barwa była dopełniająca
do barwy roztworu, np. dla żółtego roztworu wybiera się niebieski filtr.
Prawidłowość oznaczenia kolorymetrycznego zależy,
więc od przestrzegania m.in. następujących warunków:
-
roztwory powinny spełniać prawo Lamberta-Beera;
-
wartość pH roztworu powinna odpowiadać określonemu
zakresowi;
-
stężenie odczynnika powinno być ściśle określone;
-
należy utrzymywać stałą temperaturę;
-
niekiedy podczas oznaczania należy zachowywać
odpowiednie odstępy czasu między poszczególnymi czynnościami;
-
wyboru odpowiedniej długości fali, przy której
przeprowadza się pomiar należy uwzględnić ślepą próbę, czyli oznaczyć
w taki sam sposób zawartość domieszek oznaczonego składnika w stosowanych
odczynnikach i roztworac